如何选择合适的细胞培养板

细胞培养板是细胞培养实验中常用和重要的耗材，主要形状有U型和V型、规格也有多重96孔、48孔，24孔，12孔，6孔等，不同的实验需要细胞培养板的规格、形状各不相同，大家是否怎么选择细胞培养板、如何使用细胞培养板、不同的细胞培养板各有什么用途呢？

细胞培养板的选择：

细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底(U型和V型);培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等;根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。

(一)平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择：

贴壁细胞一般用平底培养板。

悬浮型细胞的培养一般用V型。

U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。

V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。

不同型状的板子自然有不同用途。平底的什麼类型的细胞都可用﹐但当细胞数目较少﹐如做克隆时﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等实验时﹐无论贴壁和悬浮细胞﹐一般均用平底板。至於U或V型板﹐一般在某些特殊要求时才使用。如在免疫学方面﹐当做两种不同淋巴细胞混合培养时﹐需要二者相互接触以刺激﹐因此﹐一般需要U型板﹐因细胞会由於重力的作用而聚集在一个很小的范围内。V型板的用途更少﹐一般用于细胞杀伤实验时﹐为了使效靶细胞紧密接触﹐常使用V型板﹐但这种试验也可用U型板替代(加入细胞後﹐低速离心)

如果是养细胞的话， 通常是选用平底的， 另外要特别注意材质， 标示%26quot;Tissue Culture (TC) Treated%26quot;就是养细胞用的。

圆底的好像没听说过拿来养细胞。 圆底的通常是拿来做分析， 化学反应， 或是保存样品用的， 因为圆底比较好将液体吸得乾净， 如果用平底的就不好吸了。 不过， 如果你是要测吸光值的话， 一定要买平底的才行。

大部分细胞培养都用平底培养板，便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致，还便于MTT检测。

圆底培养板主要用于同位素掺入的实验，需要用细胞收集仪收集细胞的培养，如%26ldquo;混合淋巴细胞培养%26rdquo;等。

(二)问题集锦

问：我看到培养板有4、6、12、24、48、96孔几种规格 ，但不知道到底什么实验用哪种规格，请指教。

答：要根据你具体的实验要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，细胞爬片一般用24孔等!要具体根据你实验来定!

问：请问哪位高手知道Terasaki板是什么培养板，与普通细胞培养板有什么区别?谢谢!!

答：Terasaki plate主要是用于晶体学研究，产品设计便于对晶体的观察与结构分析。有两种sitting 和handing drop两种方法，两种方法应用产品的外形结构也不同。材料上选择crystal class polymer ，特殊的材料有利观察晶体结构。

细胞培养板主要是PS材料。材料是treated sufface。便于细胞贴壁生长与伸展。当然还有浮游细胞的生长材料，同时还有low binding surface，有关更多实验材料上的应用与对材料的选择。

问：我想测吸光度用酶标仪，用多孔细胞培养板行吗?请问酶标板 多孔细胞培养板有什么区别?

答：用多空细胞培养板测吸光度肯定可以拉，我们经常用它来做样品的蛋白定量和MTT检测。

区别：酶标板一般要比细胞培养板贵，细胞板主要做细胞培养，但也可以用来测蛋白浓度;酶标板包括包被板和反应板，一般不能用做细胞培养，它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测，它需要更高的要求还需要特定的酶标工作液。如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子：

操作步骤

1.加样品：将标本稀释液100ul(或2滴)加到包被板内(预留阴阳性及空白对照2-5孔)，将待检血清用PBS或生理盐水按1：20稀释后取10ul加入反应孔内。

2.加对照：加入阴性对照1-3孔，阳性对照1孔，各100ul对照血清。空白对照1孔空置。

3.温育：将反应板震荡使样品混匀后，置37℃温箱或水浴反应20分钟。

4.洗板：用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。

(1)手洗：将反应板孔内容物倾出，将洗涤液注满反应孔，放置30秒钟后用力甩去，如此重复5次后拍干。

(2)机洗：5次，每孔注入洗涤液200ul或注满，停留30秒钟后吸尽拍干。

5.加酶标工作液：每孔加入100ul(或2滴)酶标工作液，置37℃温箱反应20分钟后，洗板5次，洗板操作同步骤4。

6.显色和终止反应：将底物A、B液各50ul(或1滴)加到反应孔内，37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul(或1滴)混匀终止反应。

结果判定

1.酶标仪设定波长450nm，先用空白调零，然后测定各孔OD值;如果选用双波长测定，不必设置空白对照孔。

2.当阴性对照平均OD值小于0.08，阳性对照(pc)OD值大于0。30时，说明试剂盒有效且实验操作正确，否则应当重复试验。

3.临界值(CUT%26mdash;OFF VALUE)=0.15+阴性对照平均(NC)OD值(当阴性平均OD值小于0.05时，按0.05计算;当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算)。

4.标本OD值%26le;临界值为阴性，标本OD值%26gt;临界值为阳性。

常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体(氧气)交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。

培养器皿 面积(cm2)培养液量(ml) 细胞量

96 孔培养板 0.32 0.1 10e5

24孔培养板 2 1.0 5%26times;10e5

12孔培养板 4.5 2.0 10e6

6孔培养板 9.6 2.5 2.5%26times;10e6

3.5 cm 培养皿 8 3.0 2%26times;10e6

6 cm 培养皿 21 5.0 5.2%26times;10e6

10 cm 培养皿 55 10.0 13.7%26times;10e6

25cm2 培养瓶 25 5.0 5%26times;10e6

75cm2 培养瓶 75 15～30 2%26times;10e7

培养瓶的选择：

细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底（U型和V型）；培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等；根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。

（1）平底和圆底（U型和V型）培养板的区别和选择

不同形状的培养板有不同用途。培养细胞，通常是选用平底的，这样便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致。因此做MTT等实验时，无论是贴壁和悬浮细胞，一般选用平底板。测吸光值一定要使用平底的培养板。要特别注意材质， 标示"Tissue Culture (TC) Treated"是养细胞用的。

U型或V型板，一般在某些特殊要求时才使用。如在免疫学方面，当做两种不同淋巴细胞混合培养时，需要二者相互接触刺激，这时一般会选用U型板，因为细胞会由于重力的作用而聚集在很小的范围内内。圆底培养板还会用于同位素掺入的实验，需要用细胞收集仪收集细胞的培养，如"混合淋巴细胞培养"等。V型板常用做细胞杀伤、免疫学血凝集实验。细胞杀伤这种实验也可用U型板替代（加入细胞后，低速离心)。

（2）Terasaki板和普通细胞培养板的区别

Terasaki plate主要是用于晶体学研究，产品设计便于对晶体的观察与结构分析。有两种sitting 和handing drop两种方法，两种方法应用产品的外形结构也不同。材料上选择crystal class polymer ，特殊的材料有利观察晶体结构。

细胞培养板主要是PS材料，材料是treated sufface，便于细胞贴壁生长与伸展。当然还有浮游细胞的生长材料，同时还有low binding surface

（3）细胞培养板与酶标板的区别

酶标板一般要比细胞培养板贵，细胞板主要做细胞培养，也可以用来测蛋白浓度；酶标板包括包被板和反应板，一般不用做细胞培养，它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测，需要更高的要求和特定的酶标工作液。

（4）常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量

不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2~3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量（参考下表）。若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。

培养基的选择：

细胞培养是实验室里最常见和最基本的实验了，但却不是最简单的。别小看细胞培养，这里可蕴含着大学问。有时候细胞状态不好，转染、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多，让我们先从培养基和血清说起。

◆ MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。

◆ 改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。

◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。

◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。

◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。

准备几种培养基，然后花大约两周的时间做一个简单的细胞生长实验，来选择其中最适合的。

以前大部分实验室都是用干粉培养基，但配制过程就较为繁琐，要溶解、调pH值，过滤，过程中可能会产生一些浓度误差，而且有些实验室的水质并不理想，所以培养的效果会有差异。