田七有什么用?有多少种?
三七三七 Panax Notoginseng 别名:开化三七、人参三七、田七、金不换。 植物形态 多年生草本,高达60cm。根茎短,茎直立,光滑无毛。掌状复叶,具长柄,3~4片轮生于茎顶;小叶3~7,椭圆形或长圆状倒卵形,边缘有细锯齿。伞形花序顶生,花序梗从茎顶中央抽出,长20~30cm。花小,黄绿色;花萼5裂;花瓣、雄蕊皆为5。核果浆果状,近肾形,熟时红色。种子1~3,扁球形。花期6~8月,果期8~10月。现多栽培于海拔1600~1800米的山上。主产地(原产地):云南文山。性味、性温:味甘、微苦。 功效:(1)具有良好的止血功效、显著的造血功能;(2)能加强和改善冠脉微循环,扩张血管的作用;(3)有较强的镇痛作用,具有抗疲劳、提高学习和记忆能力的作用;(4)抗炎症作用;(5)具有免疫调节剂的作用,能使过高或过低的免疫反应恢复到正常,但不干扰机体正常的免疫反应;(6)抗肿瘤作用;(7)抗衰老、抗氧化作用;(8)降低血脂及胆固醇作用;(9)保护肝脏。 三七起源于第三纪,属古热带残遗植物,分布范围极其狭小,这主要与三七在生理生态上对环境的适应能力有很大的关系。 三七为多年生宿根性草本植物,每年有一个生长周期。通常,两年以上的三七在一个生长周期内有两个生长高峰,4—6月的营养生长高峰和8—10月的生殖高峰。三七种子的发芽温度为10—30度,最佳温度为20度,种子的休眠期为45d—60d,种苗在休眠过程中需要经一段时间的低温处理才会萌发,而且对光的反应非常敏感;传统认为需要自然光照30%才能正常生长发育,故三七荫棚有“三成透光,七成蔽荫”之说;据最新研究表明,最适宜的三七棚透光度为8%—12%,超过17%三七的生长就会受到不利的影响。 三七从播种到收获,要经3年以上的时间;一年生三七的根通常用做种苗,从第二年的植株起便能开花结实,一般7月现蕾,8月开花,9月结实,10至11月果实分批成熟。 云南省三七主产区地处低纬度高原,气候的特点是夏长冬暖,热量比较丰富,年温差变化比较小,年平均气温为15.8-19.3℃(云南省气象局资料室,1982),一年内除了12月中旬至次年2月中旬,日温低气温出现≥0.0℃的天气外,最低气温多年的平均值为0-2℃,历年日平均气温稳定≥10℃的天数为265-307天,年有效积温达4863.7-6436.8℃。夏季由于雨量集中,太阳辐射明显下降,形成6-8月的平均气温为21.5-22.5℃,适宜的温度及水分条件,为三七的生长发育提供优越的自然环境。冬季月平均温度为11℃,地上部分的生长已经停止,但此时5cm地温仍保持14℃(地区平均值),这是三七茎叶在冬季仍能保持生机的原因,较高的地温,有利于根部养份的积累,特别对已播种入土种子的种胚后熟的形态发育极为有利,种胚后熟期能够通过冬季阶段时自然完成,这对三七的育苗工作,提高种子的出苗率,提供了极为有利的条件。这样得天独厚的自然生态环境,是文山州发展三七生产的有利因素。 三七产区的地貌复杂,地势起伏大,造成气温的垂直差异显著,冬春季(12月至次年4月)及夏末秋初(8-10月),受大气环流冷空气侵袭的影响,造成短时性及局部的霜冻和低温灾害,特别是低温冷害,虽未曾出现降雪和霜冻现象,气温也未降至凝霜0℃值,但气温骤然降低至作物生长的临界值以下(周以仁等,1980)造成的危害较大,这类情况几乎隔数年就可能出现。在富宁县海拔低于500m的产区,在夏季气温较高,加上焚风效应及局部环流影响,气温更有增高倾向,可能出现日最高气温≥35℃的天气,蒸发加强,很可能造成植株萎焉。以上两种情况的出现,一定要采取妥善措施,尽量减少损失。 通过栽培实践,了解到三七生长过程中,宜接受漫射光而切忌强烈阳光的直接照射。三七是典型的阴生植物,这种生态习性与三七本身的组织构造特征相一致。具有丰富生产经验的七农,对三七生长发育期适宜的光照条件,大致为三成透光七成遮阴,在具体做法中又根据三七株龄及不同生育期中透光的需求而有所区别。根据一年中的气候状况及生育期特点,通过调整天棚(纪大干等,1970)上荫蔽物的疏密程度,调节园内的透光度。例如在5月上旬,正值各类三七苗的生长初期,此时年降水量偏少,太阳辐射光较强,且日照时数长 ,为维护这一阶段三七苗的正常生长,应适当加大荫蔽度,棚内的透光度约为25-30%。进入雨季后,由于云量增多,大气湿度增大,日照时数比春季减少,总辐射也较低,而三七正进入生长旺盛期,此时宜减少荫蔽,加大园内的光照,透光度可增加到40%,具体控制园内荫蔽度的多少,需根据当时当地的实际情况而定,切忌生搬硬套。 三七产区的气候与全省一样,干湿季十分明显。文山州的年降水量比较充沛,近10年各地降水量平均为1163mm。南部地区达1300mm以上。三七生长发育期要求比较湿润的环境,植株的正常生长要求保持25-40%的土壤水分,并要求三七园内的相对湿度达到70-80%。雨季时由于年降水量的80%以上集中于5-10月,这期间园内可以依赖于大气降水。有些地区土壤渗透大,只要无降水天数较长,就可能形成干旱,园内就需要进行人工浇灌,来维持一定的湿度。水分的人工调节主要在冬、春季,这时天气晴朗,日照充足,降水稀少而风速大,蒸发力强盛,土壤水分迅速减少,这时除了进行人工浇灌外,还必须注意适当的田间管理,利用铺盖厢面草及调整园内天棚的搭盖,来保持园内的湿度。同时还必须注意各不同生长发育阶段的三七苗,对水分的特殊要求,如播种至子苗展叶期,子条的出苗期以及绿果转红果期等。发生旱情时一定要抗旱浇水,防止出现生理性干旱,直接影响红籽收成。各地的年降水量不一,必须根据当地的具体情况,同时在选择及建造三七园时,应当把水源条件作为重要问题来考虑。在年降水较多的年份或地区,则应做到在大雨或暴雨后防洪排涝,及时排除园内积水,土壤含水量过多,通气不良,如果园内较长时间处于遭水状态,直接危害植物生存,可能引起三七遭根而死亡。园内相对湿度过大时,容易引起各种病害的爆发,这在日常管理中不可忽视的。是三七生存的基础,植株通过土壤获得生存所必需的水分、养料、空气和热量,土壤的结构、肥力和通透性直接影响三七的生长发育。文山州栽培三七已遍及全州8个县,产区的海拔高度悬殊显著,从海拔340-1800m都有三七种植区,复杂的地貌形成热、水、土等条件的空间差异突出,直接影响局部地区的水、热条件,加上成土母岩类型多样,土壤质地和土壤肥力的自然差异是比较大的。我们目前所了解到三七几乎能在粘性较重、通透性差、pH值4.5-5.6的酸性红壤和黄壤中生长,也可以在pH值近中性的黑色砂壤土中生长,这完全是长期以来人为生产活动的结果。通过翻耕、施肥、浇灌、轮作等多种生产方式,在一定程度上已经改进了土壤结构,提高了土壤肥力状况,这也是新、老产区间存在的三七长势和产量等方面有差别的原因。因此在发展三七生产中,对土壤的利用要养用兼重,根据本地区土质和肥力的特点,进行合理施肥。通过正确的耕作方法,协调土壤中水、肥、气、热的状况,创造微生物的适宜生活条件,加速有机质矿化,促进养分增加,逐步改善土壤结构,提高土壤肥力,防止土壤恶化。特别在浇灌困难的山区,通过加强田间管理,调整养分状况,逐步提高土壤肥力,使土壤朝着人为活动有利的方向发展。 药用 炖鸡或炖排骨,有益气养血、治疗崩漏、产后虚弱、自汗、盗汗、有滋阳强壮作用。也治疗老年人的头风痛、腰肌酸软无力等症。方法:三七主根用冷水浸泡半小时左右,将其敲碎成蚕豆大小,用纱布包好,20克左右、加鸡肉或排骨(500克)、盐少许用文火炖1~2小时即可食用。 产品:主根 三七炖螃蟹,极有助于清热散血,舒筋活血,凡跌打损伤,瘀滞肿痛者皆可服食。方法:三七粉(10克左右)与适量螃蟹(清刷干净)用文火炖,待蟹肉炖熟时,药汤与蟹肉同食,极有助于清热散血,舒筋活血,凡跌打损伤,瘀滞肿痛者皆可服食。 产品:粉 三七须根炖鸡或炖排骨,有益气养血、治疗崩漏、产后虚弱、自汗、盗汗、有滋阳强壮作用。也治疗老年人的头风痛、腰肌酸软无力等症。方法:将三七须根(20克)放入冷水中浸泡20分钟左右,加鸡肉或排骨(500克)、盐少许用文火炖1~2小时即可食用。 三七药酒,具有消肿定痛、活血散瘀、舒筋止痛的功用,用于瘀血滞痛、腰酸背痛、四肢酸软、劳伤疼痛、跌打损伤、无名肿痛等症。方法:100克三七(可直接用三七主根泡也可将其敲碎成黄豆大小)、1千克白酒(50度左右)。三七和白酒泡30天以上可以服用,每次10毫升,每日3次。 三七粉(可将三七主根研成粉状或直接购买有质量保证的三七粉)。 三七片或三七胶囊:1.跌打损伤等各种出血症,直接用三七粉撒布伤口即可,伤口较大的,撒布三七粉后,再用消毒纱布加压包扎,可迅速止血。2.三七粉、三七片或三七胶囊,一次2克 ,每日2~3次,温开水或温米汤送服。可治疗各种体内出血,如胃出血、鼻血、吐血、便血、尿血、子宫功能性出血、皮下出血、眼出血及脑血管出血。3.三七粉、三七片或三七胶囊一次2克 ,每日2~3次,温开水或温酒送服。可治疗血瘀而致的月经不调、闭经、痛经及产后恶露不停,小腹瘀滞疼痛等。4.适量三七粉与适量蜂蜜调和成糊状,直接敷面10~20分钟,具有活血润肤、抗衰老的功用,长期敷面可使皮肤光洁、细嫩(敷面期间,再用蜂蜜水内服三七粉效果更佳)。5.三七粉、三七片或三七胶囊一次2克 ,每日2~3次,温开水或蜂蜜水送服。可治疗支气管扩张症、肺结核和肺脓肿等引起得咯血。具有止血、镇咳、祛痰及镇痛作用。6.三七粉、三七片或三七胶囊一次2克 ,每日2~3次,温开水送服。能使心肌耗氧量减少,有助于减轻心脏负担,故能治疗冠心病和心绞痛。7.三七粉、三七片或三七胶囊一次2克 ,每日2~3次,温开水送服。能扩张血管、降低血压以及治疗脑动脉硬化,以及因血脂和胆固醇增高而导致的疾病;三七并具有抗肿瘤抗癌症的作用。8.饮酒前或饮酒后(饮酒前服用效果更佳),温开水送服适量三七粉、三七片或三七胶囊,能保护人体肝脏。 三七花用法活血化瘀1.少量三七花(3~5朵)直接用开水(200毫升)冲泡,具有清热、护肝、降压、镇静安神的功效。2.少量三七花(3~5朵)与适量青果一起用开水冲泡,能够治疗急性咽喉炎。3.10克三七花、四个鸡蛋、先用花和鸡蛋煮10分钟,然后将鸡蛋敲碎壳再煮30分钟,花和鸡蛋同吃,可治疗高血压。4.三七花放温水泡1020分钟,把肉炒到五成熟,再将花和肉一起炒,具有活血化瘀的功效。 三七 (一)概述 别名田七、金不换。 为五加科植物三七(Panax pseudo-ginseng Wall.),以根、根状茎入药。是名贵中药材,生用可止血化瘀、消肿止痛,是云南白药主要成分,同棵植物的花叶也能入药,当茶饮。生产云南、广西、四川、湖北,江西等省也有栽培。陕西秦岭以南引种成功。 (二)植物特性 多年生草本植物。茎直立,高30~100厘米,有纵行条纹或带角棱状。地下有横卧肉质根茎与根。掌状复叶3-5故轮生于茎顶,小叶5~7枚,卵圆形或披针形,叶绿有锯齿,沿叶脉密生细绒刺毛,伞形花序,单生于总花柄顶端,上生多数小花。核果浆果状,近于肾形,嫩时绿色,熟时红色,种子1-3颗。 (三)生长特性 喜温暖,忌严寒。冬无严寒、夏无酷热,四季温差小的地区适宜栽培。受冻后根和种子均发生冻害霉烂。喜半阴半阳,适宜的地形、方位和坡度,有水源的地方,忌烈日直射。云南产区年平均气温20.1℃,平均最高温度34℃,平均最低温度4℃,年平均气温在15~17度间适宜,全年降水量920.9毫米。整个生长季节要求空气相对湿度很高,以70%~90%适宜,低于50O~60%就会引起严重于叶症(生理性病害),致使全部叶片干枯脱落。三七策一年只能长出掌状复叶一片,二年三片。 (四)栽培技术 1.选地整地 土壤一般以黑色砂质壤土反腐殖士为最好。土壤酸碱度pH4.5~7为宜。前茬玉米、豆类、花生为好,勿选用预科做前茬作物。8月下旬至播种前耕地3次,第一次耕深3厘米,第二次耕深4-5厘米,耙一次。第三次耕深5厘米,将土耙细,随即做成高25-30厘米、宽100-110厘米畦,畦面做成梳背形,两畦间排水沟45~60厘米,移栽地与播种地相同,然后在畦面上铺玉米秸或杂草5厘米厚左右,烧成灰,再每公顷准备充分腐熟的粪肥:炕土52500千克,厩肥22500~30000千克,饼肥375~750千克,总量75000千克,待播种与定植时用。播种与定植时施底肥的方法有三种:(1)把肥料直接放到根土或种子上做覆土用。(2)把肥料的一半掺入畦土内,另一半做覆土用。(3)覆少量畦中土,把肥料再铺在上面。以上3种方法均要求达到覆土深度2厘米。 2.繁殖方法 用种子繁殖。 (1)选留良种 作种用的三七种子应选三年生植株所给种子,每年11月果实红熟时,随红随采,或者80%以上成熟时选晴天一次采下,去掉果皮,将成熟饱满、无病虫害的种子也采也播。如果来不及播种时,一定要将果实放筛内,厚约0.5~1厘米,放阴凉通风处可保存10天左右,外运种子,应去掉果皮,清洗干净,拌入2倍湿破,贮放水箱中。 (2)播种方法 主产区多采用冬播(陕西也冬播),北方也可采用春播(化冻后)点播,行距2厘米,株距1.7~2厘米。撒播种子分布不均匀,植株生长不一致。覆土(实际上就是盖肥料,按前述施底肥的方法做或盖过筛细土)1.7~2厘米,盖没种子即可。上盖杂草,避免畦土板结。南方冬播约3个月出苗,4个月出齐。北方冬播,播后盖草,防止土壤冻结,若春播种子必须放湿砂贮藏,用裂口或萌发的种子播种,播后一个月出苗。 (3)定植方法 播后一年或二、三年定植,南方地区多在12月份定植,北方多在11月或者3月中旬至4月初(土壤化冻后),芽末萌动时定植。挖苗时不要伤根,选无病虫害健壮的三七根,按大小分级,分别定植。定植方法:①在整好的畦上横向开槽(打塘),底平,深6厘米左右,宽以能放入三七根即可,芽苞向被下,尾根坡上,行株距4-5厘米。②双株栽植:在畦面上横开小沟,深4~5厘米,沟距5~6厘米。然后将三七根芽对芽,尾对尾顺沟每隔6厘米放入两棵,畦边的两棵,根问畦内,边裁边盖已准备好的肥料,厚约1厘米,以不露出芽苞为宜,再盖草约1厘米厚,以不见上为原则。 近年试验证明,直播三七禁根深,抗旱能力增强,并显著地提高产量。 3.田间管理 (1)追肥 肥料要腐熟,适量多次。秧苗期间多施熏土,展叶后施第一次,每公顷2250~3000千克;半月后再施一次,5月后又追施猪、马、人粪和油饼混合肥,每公顷37500千克,6月后每月追清粪水30000千克,直到8月。定植后翌年4~5月施一次干肥。6-8月每月施清粪水一次,每公顷22500~45000千克,以多次适量为原则。3年以上的三七,追肥时间和次数,更比二年三七提早和增加,展叶后开始,每月一次清粪水,每公顷22500~30000千克,并加施草木灰于现蕾期和开花期施混合干肥,每公顷45000千克,9-10月再施一次盖芽肥,护芽促壮。 (2)排灌 三七的根系分布在土表层,抗旱能力很弱,在整个生长期,必须保持土壤湿润。若土壤干燥,三七根干了,以后再行浇水容易烂根。定植和播种盖草后一般浇一次逐水,以后大约每隔10~15天浇水一次,雨季加强排涝,做到园内无积水,园外水畅通。 保持空气湿度:在北方试种三七,7月份前干旱季节,空气相对湿度很低,干叶症发生严重,可用细竹支一弓形架,用塑料薄膜覆盖以保持较高的空气湿度,但要注意通风,雨季撤去薄膜。 (3)搭棚遮荫 畦做好后,用木杆、竹子、玉米秸、杂草等作材料,搭成100~180厘米高平顶式的荫棚,透光度30%,四周围篱笆。荫棚的透光度必须据三七不同生长期和季节,随时加以调节,一年生和三年以上三七要比二年生需光的强度略大;播种出苗期和抽薹开花结子期也需较强的光照。特别是出苗期,一定要有足够的光照,苗木能长得粗壮,对抵抗病虫害和丰产有重大意义,故苗期透光度不能低于35%,此时透光度小,苗就会徒长,细弱,七农称“高脚”苗,易感染病害。干旱阳光强烈季节应适当加密荫棚,减少透光度,阴雨连绵的开花结果季节要加大荫棚的透光度。群众的经验是“两头稀,中间密”。 (4)打花薹 打花薹是提高三七产量和质量的新措施。从二年生开始,每年在三七抽更开始开花时及时摘去,留种的除外。 4.病虫害防治 (1)立枯病 又名“烂脚瘟”。病原是真菌中的一种半知菌,危害种子、种芽及幼苗。种子受害腐烂呈乳白色浆汁状,种芽受害呈黑褐色死亡;幼苗受害假茎(叶柄)基部呈暗褐色环状凹陷,幼苗折倒死亡。 防治方法:①播种前用多菌灵或紫草液进行土壤消毒。②发现病株及时拔除,在病株周围撒施石灰粉,井喷洒50%甲基托布津1000倍液或50%甲基立柏磷1000倍液。 (2)根腐病 又名“鸡屎烂”,是真菌中一种半和菌,危害根部,受害报部黑褐色逐渐软腐呈灰白色浆汁状,有腥臭味。 防治方法:①选排水良好的地块种植,雨季及时排水。②移栽时选用健壮无病三七。③及时拔除病株和用石灰消毒病穴。④发病期用多菌灵100倍或50%甲基托布津1000倍液浇灌病区。 (3)疫病 又名“搭叶烂”。病原是真菌中一种藻状菌,主要危害叶片,受害叶片呈暗绿色水渍状。6-8月高温多湿时发病重。 防治方法:①清洁田园,冬季抬净枯枝落叶,集中烧毁。②发病前喷1:1:50波尔多液,半月1次,连续2~3次;发病后喷65%代森锌500倍液,或50%退菌特1000倍液,或敌克松500倍液,7天1次,连续2~3次。 (4)炭疽病 病原是真菌中的一种半知菌,危害地上都,叶部病斑黄褐色,有明显的褐色边缘,后期病斑上牛小黑点,易穿孔;叶柄和茎部病斑为中央下陷的黄褐色棱形斑;果实上病斑呈圆形微凹的褐色斑,高温多湿发病重。 防治方法:①清洁田园,及时烧毁枯枝落叶。②选用无病二七作种,移栽前用1:1:200波尔多液浸一下,晾干后移栽。③种子用100~150倍的40%福尔马林浸10分钟用清水洗净,晾干后播种。④发病期喷65%代森锌500倍,或50%退菌特1000倍液,7天1次,连续2~3次。 (5)锈病 土名“黄腻’、“黄疱症”。病原是真菌中的一种担子菌,主要危害叶片,叶上病处初呈针尖突起的小黄点,扩大是圆形或放射状,边缘不整齐,病菌孢子堆破裂后散失黄粉。 防治方法:①冬季剪除病株的茎叶,喷波美1-2度石硫合剂。②发病期喷200~300倍二硝散或波美0.3度6硫合剂,或敌锈钢300倍液,7灭1次,连续2~3次。 (6)白粉病 病原是真菌中一种半知菌,主要危害叶片,病叶上布满灰白色粉末。 防治方法:①冬季清园并剪除病株叶,喷波美1~2度石流合剂。②发病初期喷渡美0.3度石硫合剂或50%甲基托布津1000倍液,7天1次,连续2~3次。 (7)短须螨 又名火蜘蛛,属蜘蛛纲蝉螨目叶螨科,成、若虫群集于叶背吸食汁液并拉丝结网。使叶变黄,最后脱落。花盘和红果受害后造成萎缩和干瘪。 防治方法:①冬季清园,拾净枯枝落叶烧毁,清园后喷波美1度石硫合剂。②4月开始喷渡美0.2-0.3度石硫合剂,或用20%三氯杀螨砜可湿性粉1500~2000倍液,或25%杀虫脒水剂500~1000倍液喷雾,每周1次,连续数次。 (8)地老虎 参见人参的防治方法。 (9)蛞蝓 又名早螺蛳或鼻涕虫,为一种软体动物。咬食种劳、茎叶成缺刻。晚间及清晨取食为害。 防治方法:①冬季翻晒土壤。②种前每公顷用300~375千克茶籽饼作基肥。③发生期于畦面撤施石灰粉或3%石灰水喷杀。 (五)采收加工 种植三年生以上即可收获加工,12月至翌年1月或7~8月(立秋前后)为收获期,一般多在花前控取,称春七。若果实红熟后挖取,称冬七,则根瘦而皱缩,质量差。最好在开始开花时除掉花更,则其根充实饱满,品质佳。冬七折干率没着七高。 挖取后摘除地上茎,洗净泥土,剪去芦头(羊肠头)、支根和搞去须根,称“头子”。将头子暴晒一天,进行第一次揉搓,用力要轻,以免破皮,反复日晒,揉搓,使其紧实,直到全干,即为“毛货”。再将毛货置麻袋中加租糠或稻谷往返冲撞,使外表呈棕黑色光亮,即为成品。将剪下的芦头(羊肠头)、支根、须根分别晒干,商品称“剪口”、筋条和“三七根”。遇到阴雨天,可行烤干。用木炭为好,在室内事先搭好的100厘米高的架子上放竹帘,三七铺在上面,火不宜太大,火力要均匀,烘的过程中不断翻动。进行揉搓方法同上。
家庭组织培养
植物的组织培养没有最基本的条件和物品是搞不成的,当时合理的利用一些最简单的用具也并非无法办到。
一、最必需的物品
1、.家用高压锅 1个最好大一点的,装的东西多一点。用于培养基、无菌水等的消毒
2、接种箱 (无菌箱)1个 ,需要自己自制,用一些木板和一块玻璃和二尺布料。用于接种和转移。
3、药用天平1架 最好是500g称量的,小一点也可以,主要用来称琼脂、糖等物品。
4、不锈钢锅或铝锅(煮汤、面条的那种)买。用于煮制培养基用的。
5、搅拌和分装培养基用的调羹一个,用于煮制和分装培养基。
6、培养用的瓶子若干,
7、制棉塞用的棉花、纱布和线若干,用于做瓶口的塞子,要注意的是,棉花要使用普通做棉衣的棉花,不要用医院用的脱脂棉,这样容易穿塞污染。
8、牛皮纸、橡皮圈若干,用于包瓶头和扎包头纸用。
9、酒精灯1盏、解剖刀1把,刀片若干、镊子2把、10ml、100ml量筒各一个,2ml移液管1只、药棉若干。
二、怎样解决蒸馏水和基本药品
培养基的用水在一般人的心目总是觉的十分重要的,其实是多余的担心。冷开水、清洁的河水都是给以用的,并不影响培养的效果。市场上出售的纯净水更是一般培养基理想的用水。最常用、最必要、用量最大的只需购买以下几种就行了。
1、MS培养基的大量元素(家庭或所谓袖珍组培室的培养一般采用MS基就可以了。)共5种。也可以买市售的MS培养基
(1)、硝酸铵
(2)、硝酸钾
(3)、 氯化钙
(4)、硝酸镁
(5)、磷酸二氢钾
2、酒精
3、精密试纸(PH 5.4-7.0)
4、漂白粉或漂白精
5、琼脂
6、白糖
7、福尔马林
8、高锰酸钾(可以到医院或药材商店去买)
9、微量元素、铁盐、维生素类以及激素类药品应用量极少。比如一些激素、维生素类的药品及有针剂也有片剂,他们都有比较准确的含量,你可以去按你的需要去配制比例。
爱好者在家庭环境下进行组织培养的探讨与建议植物组织培养技术,尤其是快速繁殖,并非只有专业人员和专业实验室才能够完成的。作为对多肉植物和组织培养有着浓厚兴趣的爱好者,在充分利用家庭条件的基础上,同样可以制备出自己的试管苗来的。在我们进行多肉植物的栽培中认识到,一些比较名贵的园艺品种,比如:万象、玉扇、寿、高纹鹰爪等十二卷属品种,还是缤纷橄榄、何鲁牵牛等块茎类植物,甚至于星球属、岩牡丹属等等,这些植物的常规繁殖系数很低,他们都可以采用组织培养来解决其繁殖问题,并且可以得到相当数量的幼苗。对于奇想天外等种子萌发困难的植物,同样可以借助组织培养来进行无菌播种。在进行组织培养过程中,不但可以对培养的植物有更深一层的认识,对常规的栽培有着相当大的意义。许多搞组织培养的专家,最初都不是专业学组培的,就是凭着兴趣和探索精神取得辉煌成绩的。关键是,爱好者有着浓厚的兴趣,非凡的观察力和细致入微的操作,这些都可以弥补非专业的缺陷,并且可以充分利用日常生活中的各种可利用资源,这些就足以让爱好者在家庭环境下完成组织培养了。同时这也不仅仅满足了自己的兴趣,还可以有一定的经济收益,甚至可以有所创新和发明。
一、如何解决场地和基本设备:
进行组织培养,没有一定的设备是无法开展的。正规实验室的组织培养设备是昂贵的,不适合家庭消费,但如果能有途径买到廉价的实验室设备,那就在好不过了。如果没有办法搞到实验室设备,就不妨动手自己制作一些简单的设备。
1.无菌操作的主要设备——接种箱和压力锅:
接种箱:植物组织培养的主题操作需要在一个相对密闭的无菌环境中进行。那么说我们首先要创造一个密闭的环境,可以利用一些木料、塑料板、有机玻璃、铝合金骨架等等廉价的材料,动手粘合一个小巧的接种箱。具体的参数可以找一本“食用菌栽培”的书籍,模仿种蘑菇的接种箱做一个即可。需要注意的是,组织培养的接种箱的密闭性要求比较高,尽量避免腐朽的木材和易生锈的材料,箱子的顶端按放两盏灯:20w的紫外线灯和20w的日光灯。箱体的周边尽量采用玻璃材料,因为这样便于观察,有时候接种箱还可以借用为培养箱,周边采用玻璃材料更方便于观察和培养。
高压锅:主要用来对培养基和其他材料的灭菌。在实验室通常使用医用高压灭菌器,然而在家庭要充分利用厨房使用的高压锅,高压锅的压力要低于灭菌器,但是适当延长灭菌时间,还是可以取得较好的效果的。比如:对培养基灭菌40分钟就基本上可以达到灭菌效果(灭菌器是20分钟);无菌水采用间歇灭菌法,先用高压锅压40分钟,放置24小时,再压20分钟即可达到效果。
2.场地:
这个就因人而易了,总体的要求就是进行组织培养操作的地方要尽量无尘,减少空气流动,最好有一定的阳光。比如书房、写字间都可以用来进行无菌操作。
进行培养基的配制可以借用一下厨房,但所使用的器具必须和厨具分开。一般说,组织培养中的几乎全部化学物质对人体是无害的,除了少数激素类物质和灭菌剂。对于有毒害的物质,需要认真保管,以免发生危险。
3.辅助设备:
主要指冰箱,它是用来储存化学物质和培养基的。天平,可以采用感量在100克的托盘天平,甚至用中药的药衡都可以代替。培养架,这个就更简单了,采用铝合金-玻璃的培养箱既可以满足要求,如果日光不足,可配合日光灯补光等。
4.化学试剂:
化学试剂是不可缺少的,因为组织培养的核心就是培养基的成分,而并不是简单的无菌操作。一些用量较大的化学物质是有必要买的,比如大量元素(硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙等)、高锰酸钾、甲醛、酒精、白砂糖、琼脂等等。微量元素和有机复合物不需要购买,因为它们的用量很小,我们可以用蔬菜浸汁或者马铃薯浸汁来代替。激素是必不可少的,他们的称量需要借助分析天平,但这是家庭条件所不允许的,如果有条件可以借助关系单位代替配成母液,每次取一些使用即可。最好的办法是到农资商店(卖农药化肥的地方),它们一般出售农业用的激素,有的是用安瓿装的,按照一定的比例加入到培养基当中即可。近几年来,有些化学品公司开始生产植物组织培养基原粉,只需要称取一定量加水即可,很方便。比如泛生化学品公司生产的ms原粉,只需要称量40克,加1升水,用微波炉加热5分钟即可分装,相当简便。
消毒剂通常采用氯化汞(剧毒),如果不容易搞到,可以用漂白粉代替。
调节酸碱度时,可以采用家庭常用的纯碱和白醋。
5.培养容器和玻璃仪器:
组织培养的容器要求并不高,只要玻璃颜色为透明色即可(钠玻璃不可以)。
我们可以到垃圾站去看看,捡回一些废旧的果酱瓶就可以了。比较好用的是阿香婆辣酱瓶,我们实验室也是采用的这种瓶子。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可,如果不好找到,可以采用微波炉专用的锡箔纸甚至方便面的袋子,折叠成双层,用橡皮圈固定即可。
其它玻璃仪器,比如烧杯、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替;一些度量仪器,如量筒和移液管最好到玻璃仪器商店购买,恐怕花不了20元钱就可以配置一套相当棒的组培玻璃仪器。
6.其它:
还有一些用品是必需的。比如精密ph试纸(5.4~7.0),需要买一本,大约花1.5元即可搞定;酒精灯也不需要买,用墨水瓶配上一个玻璃环,再加上一个棉花芯,最后用农夫山泉矿泉水的瓶盖做灯冒,这样的酒精灯很小巧,适合接种箱使用。刀子剪子镊子是必需的,到花市的工具摊位上,花10元钱全部搞定,注意选比较小巧的工具。
关于用水,按理说应该使用蒸馏水,但是我们家庭饮用的纯净水比蒸馏水还要纯,那么说借用一些饮用水就可以了。我们曾经采用康师傅纯净水进行动物细胞的培养,效果都是很不错的,更何况于植物细胞培养了。
以上是组织培养的基本设备和试剂,主要突出了他们相关的替代品,因为作为组织培养中的快速繁殖,它的要求是相当低的。我们的家庭培养和工厂化是不同的,工厂化生产组培苗要追求高增殖率,所以它的要求就比较精细和标准。我们的家庭培养则不需要那么准确,只要达到培养成功的目的即可。当然,如果想提高增殖倍率和试管苗的品质,必须尽量贴近实验室的用具和器材,代用品总是有一定的缺陷的。
(一)必须的设施物品及代用品
1、代用品
家庭用的电冰箱,可用于贮存培养基母液(4℃)及需低温贮存的药品(如生物调节剂)。
高压锅:它可用于培养基、无菌水、玻璃器皿及其他组培用具的消毒灭菌。如所用水硬度大可用凉白开水,进行消毒灭菌。避免被消毒灭菌物品表面结垢。
不锈钢锅或铝锅:它可用于培养基、溶化琼脂(起水浴锅作用)及组培用具消毒灭菌。
刷净的废弃食油桶:它可以用来贮存蒸馏水。
小白瓷碟:可以用于接种及盛放消毒液(若放消毒液,就不要再食用,以免中毒)。
日光灯:它可用于组培过程中光源补充。
洗净废弃的罐头瓶:它可以用于组培培养之用,代替锥形瓶、试管。
组培场地可在自己的房间内进行。在配制培养基和接种时,不要赶在家庭成员较多时进行,如室内已安装了空调,那么在初代培养和继代培养、乃至小苗过渡时均有好处。
2、自制用具
(1)接种箱的制作:组培过程中的超净工作台是很贵重的设备。如果我们用自制的接种箱来代替,就可以大大节省开支,有利于普及。
自制的接种箱的用料,可以是胶合板、纤维板、玻璃(3毫米厚)、木条(装修房屋用的龙骨),甚至可以用使纸板的包装箱(包装箱的质量要稍好一些的,如电视机的包装箱),也可以用有机玻璃。
其接种箱的大小,可以根据各自的家庭条件制作。制作太小不便于操作,但相对来说消毒容易,且占地较少;制作较大的便于操作,但消毒工作显得不易,且占地面积较多。一般来说作成70厘米长、45厘米宽。50厘米高较为合适。
(2)培养箱的制作:培养箱可代替培养室,也可以用于过渡苗使用。它可以用玻璃制作,或利用长方形鱼缸。因此,可用玻璃粘结制作。其大小可按自己家庭居室面积和组培的量来决定。
3、需购置用具
普通天平(500克):用于称量配制培养基药品,或用称量金银、中药的戥子称,用于称量配制培养基药品、微量元素及生物调节剂;或购买微量元素及生物调节剂时,买已分装的。酒精灯1盏:用于接种时,灼烧消毒灭菌。漏斗(亦可用购买桶装食用油,所配给的漏斗):用于分装培养基用。长镊子2把:用于接种。解剖刀2把、刀片若干:用于接种。10、50、100毫升量筒各1个:用于配制培养基用。长把牛角勺2把:用于配制培养基取药品。1、2、5毫升移液管各1个:用于配制培养基用。
耐高温塑料膜或牛皮纸:用于包扎培养瓶口及表糊自制接种箱内部棱角处。橡胶圈:用于绑扎培养瓶口。脱脂棉:用于操作人员及组培用具酒精棉球消毒。pH(5~7)试纸1本:用时可剪成小条检测培养基pH值。酒精1瓶:用于酒精灯及消毒。漂白粉1瓶:用于消毒。福尔马林1瓶:用于接种箱消毒(在每次操作前2~10小时,将10~20毫升福尔马林倒入小白瓷碟内,在操作前取出)。MS培养基所需药品;用于配制培养基。盐酸及氢氧化钠:用于调pH值。如若购置1盏紫外灯,进行室内及接种箱消毒更为理想。
(二)操作时注意事项
家庭操作与单位不同,因而要注意以下事项:要注意安全,妥善保管药品。特别对老人和小孩;操作时要消毒仔细严格,接种时操作人员戴好口罩、工作帽,避开电风扇及大风沙天气,家庭成员多时避免操作;消毒前后避免家庭所养宠物进人工作间;药品称量要准确无误;如果家庭不具备温度调控(如调温空调),应避免在盛夏、寒冬进行;红掌组培要一步步来作,可先作容易组培的花卉,待取得经验后再做难作的花卉。
1.培养容器和玻璃仪器的准备:
进行培养基的配制首先要准备好培养瓶和配制使用的玻璃仪器。培养瓶一般使用各种果酱瓶,要先用洗洁精浸泡瓶子4~8小时,再用流水冲洗数次。其他的玻璃仪器同样需要这样清洁,直到玻璃壁上不挂水珠而是成为水膜为止。清洗完毕的玻璃容器要倒扣,空去瓶内的水。
清洗干净的容器要注意防尘,尽量放置在玻璃柜中。更简单的是用干净的毛巾将容器盖住。
移液管要用吸球来清洗,反复用蒸馏水吹吸直到洁净为止,将移液管放置在一个长筒中,便于使用。一般移液管只能使用一次,即要清洗,所以有多必要准备几只移液管,建议:10ml/2支,5ml/2支,1ml/5支。
2.培养基的配制:
经典的组织培养用培养基是ms配方,其基本上划分为:大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、植物激素、糖和支持物。这些成分的用量都在毫克级,用普通天平是难以称量的,为了解决这个问题,我们可以按比例放大各成分的用量配制成母液,使用的时候按一定比例加入即可。
下面将一种ms培养基的母液配制方案公布如下:
大量元素:硝酸铵66.0克;
硝酸钾76.0克;
无水氯化钙13.3克;
七水硫酸镁14.8克;
磷酸二氢钾6.8克。
以上分别溶解后合并定容到1升,每配制1升标准ms培养基取25毫升。
铁盐:七水硫酸亚铁5.56克;
乙二胺四乙酸二钠(edtana)7.46克。
以上两种分别加热溶解,混合,定容到1升,调整ph到5.5以下,每配制一升ms取5毫升。
微量元素和有机复合物的用量过于微小,为了简便我们可以用蔬菜提取液或者马铃薯提取液代替。通常我们习惯用100克菠菜加100ml的水煮沸10分钟,过滤留滤液,每配制1升ms培养基加入20~50毫升提取液。同样也可以使用带皮马铃薯100克加200毫升水煮沸15分钟,过滤留滤液,每升ms加入50~100毫升即可。
加入上述各组分后,每升ms培养基还需要加入白砂糖30克,琼脂7克。
这里要说明的是,糖和琼脂都是可变的量,要根据需要调整。另外制作果冻用的卡拉胶也可以代替琼脂,透明度更好。
上述各成分加入后,定容到800毫升左右,用微波炉加热,直到琼脂全部溶解为止。此时加入所需的植物激素(通常配制成0.1%溶液,这样每取1毫升,换算到培养基中就是1ppm)。然后加水定容到1100毫升(1.1升),之所以多出0.1升是为了抵消分装和消毒中的损耗。最后用酸碱调整ph到5.8~6.0。
3.使用ms原粉配制培养基:
目前国内的一些化学品公司开发了简便的ms培养基原粉,大大简便了培养基的配制,根据不同公司的说明选择培养基的种类。下面就以ms原粉为例: ms培养基原粉,包括了大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖和琼脂,一般按使用方法称量,微波炉加热溶解,加入激素,定容到1100毫升(1.1升),调整ph值到5.8~6.0。
4.分装:
将配制好的培养基分装在培养容器中,注意要趁热分装,因为琼脂在40度以下就会凝固。每个培养瓶装培养基大约是瓶容积的1/6~1/5,注意不要将培养基挂在瓶的外壁,这样容易造成污染。分装后用聚丙烯薄膜或着方便面的袋子封口,用胶圈固定(胶圈尽量选择自行车的内胎,这种胶圈比较耐热)。
5. 灭菌:
采用家庭压力锅消毒,建议到医疗器械用品商店买一些“灭菌效果试纸”,它们可以指示灭菌效果,当灭菌达到效果时会变色。把试纸和培养基同时放入锅内,加热到有大量蒸汽冒出,再加上压力伐,维持小火30~40分钟。
灭菌完毕后自然冷却,将培养基取出,放在阴凉无尘处备用。
6. 接种箱的准备:
新制作的接种箱必须要清洁干净,尽量做到无死角。每次使用前2小时,将操作所需要的全部物品放入接种箱,再用一个小烧杯加入3~5克高锰酸钾放入接种箱内,在箱内向烧杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液,大约几秒钟后会看到甲醛蒸汽出现,这样可以对接种箱内的所有物品进行初次消毒;同时打开紫外线灯照射。紫外线灯是高电压穿激汞蒸汽产生的,紫外线进行第二道灭菌,在紫外线照射大约15分钟后,会激发氧气形成臭氧,臭氧作为第三道灭菌防线,这样经过三次灭菌,接种箱基本上可以达到无菌标准。
在操作前15分钟内,向刚才蒸发甲醛用的烧杯中倒入5毫升浓氨水,因为甲醛对人体有毒害作用,氨水可以和甲醛形成一种叫做“六亚甲基四胺”的固体物质,从而中和了甲醛的刺激性蒸汽。这个时候紫外灯不要关掉,要继续照射,直到操作前5分钟关闭,维持黑暗5分钟,然后再打开日光灯进行操作。维持5分钟黑暗的原因是,紫外光对微生物的杀灭是作用于dna的胸腺嘧啶,形成四聚体,但是微生物具有一种光复活蛋白,可以在有可见光的环境下还原胸腺四聚体,而使微生物复活,这个作用叫做“光复活作用”,所以在关掉紫外灯后必须维持黑暗几分钟,避免光复活作用的出现。
怎样在家庭开展组培工作
制备
家庭组培因受到条件的限制,不可能配置大量的配养基,,一般每次配置1升为宜。煮制后用PH试纸测定后,分装成35-40瓶,塞好棉塞,包好包头纸。(棉塞一定要用作棉衣的棉花卷制,不能使用脱脂棉,然后用纱布包紧,用棉线扎好。棉塞的松紧以手提棉塞瓶子不滑落为宜。)然后放入高压锅里高压灭菌,待高压锅喷嘴喷出蒸汽时,扣上压力阀,从压力阀喷气时起计时,连续维持15-20分钟后关火,压力消失后,打开锅盖,取出配养基,放入接种箱内待用。初次实验时,灭菌后的培养基应放置三五天后,观察无霉菌生长时才能使用。如有霉菌长出,这说明灭菌时间不够,,需要适当增加灭菌时间。
接种
将灭菌后的配养基、无菌水、消毒药水及使用的器材放入接种箱内,因接种箱内的体积相对较小,所以所用的一切物品都要有序地摆放在相应的位置上,不能随意摆放,箱内湿度较大,点酒精灯一定要是用打火机,不要使用火柴。要特别注意准备好装污水、污物的容器,尽可能地大一些,因为操作时是不容许开箱取物的。把所有的物品放置好以后,将一装有10-20ml福尔马林的磁杯放入箱内(最好不要使用玻璃杯,因反应时温度较高,容易炸裂。),倒入2-5g高锰酸钾(PP粉),使其蒸气充满箱内,达到灭菌的效果。这时要将接种箱的通气孔和操作孔封闭好,避免甲醛蒸气很快散尽。待箱内蒸气散尽后,才能开始接种工作,这段时间大约需要5-10个小时。
接种时,揭去密封在接种箱通气孔和操作孔上的密封物,取出熏蒸用的磁杯,将接种用的材料送入接种箱内,开启紫外线灯,十五分钟后关闭紫外线灯,开启照明灯,即可开始工作。操作时一定要树立无菌观念,要把一切物品都看成是带菌的,要时时都注意防范。工作是由于箱内温度较高,湿度较大,手容易出汗,所以每接种一瓶后都要用酒精擦拭手指,也可以戴指套。另外,操作时要注意防火,由于空间较小,一不小心就容易烧伤手指或引起酒精起火。打开瓶塞时,要将瓶口置于酒精灯上方,用右手的无名指和小指夹住棉塞尾,轻轻将棉塞拔出,棉塞不能置于箱内物品上,应用手指夹住,接种后,将瓶口在酒精灯上烧灼一下,棉塞也烧灼一下,,然后在酒精灯火焰上方轻轻塞好,扎好包头纸,用铅笔标明品种、接种日期、编号等,然后重复下一瓶。
其实,用接种箱接种与超净工作台相比较,工作时人要感觉舒适得多。污染率也是很低的,操作熟练后几乎没有什么污染发生。接种后愈伤组织分化、小苗分化、生长状态与在超净台上接种的没有什么两样。
培养
在家庭的业余条件下培养培养的条件不可能得到专控,所以要充分的利用自然条件,接种后的培养瓶可以放在有较强散射光的地方,如靠窗的书柜、写字台上,但要避免日光直射,一般室温在22-28摄氏度时都能正常生长,不是特殊的品种不需要特殊的护理。如室温太低,可以用纸板、木条、塑料薄膜做一个简单的培养箱,里面装一两个15-25瓦的白织灯,既可以补助光照也可以提高培养的温度。夏天温度过高时,有条件的可以摆放在空调室内,,没有空调室的,降温虽然困难一些,但大多数试管苗是可以耐受的,不至于死去。小苗长出后,摆放在书柜或工作台上,感到自己培养出来的生机勃勃的小生灵,无疑是一种享受。
栽培
当小苗长到一定的时候,就可以配置一些生根配养基将小苗转移培养生根,待长出一定根系时,就可以出瓶种植了。小苗出瓶种植的时候一定要注意以下几个方面,一是要适当降低温度;二是要增大湿度;三是要严格控制杂菌危害;四是要保证种植介质的疏松透气;五是要保证适当的光照。我通常是用跖石、木屑、稻谷壳混合作基质,把小苗种植后用百菌清喷雾浇根,盖上塑料薄膜,少量的小苗干脆用玻璃杯盖住,大约15天后就能揭去覆盖物,便可进行正常管理了。
家庭开展组培其实也并不是一件什么很困难的事情,只要多开动脑筋,多想一些办法,做起来也是很容易地。万事开头难,办法总比困难多。我1974年在一个县烤烟研究所里当所长,原来条件不允许,科研经费很紧张,刚开始的时候,一年的科研经费只有3000元,那年我做过烟草的花药单倍体、水稻花药培养、柑桔胚乳培养、黑皮果蔗茎尖组织培养、田三七愈伤组织培养、黑节草(石斛)种子的无菌培养、体细胞融合,都获得了很好的成绩,我们就是用这种方法做的,当时北京、上海很多的研究单位来看了很吃惊,他们认为很珍贵的组培小苗,被我们丢得到处都是,觉的不可思议,他们做不出来的,竟然在我们一个十分闭塞的山区里可以做出来。我说这个话的意思不是为自己吹嘘摆功,而是告诉想从事这个行业的朋友,不要自己把自己的能量看得太低,也不要迷信权威、只要自己有信心,严格地按照科学的规律去做,没有什么做不了的,没有什么办不到的。
家庭组培培养基的选择与效果评价
选择合适的培养基是植物组织培养成功的基础。
选择合适的培养基主要从以下两个方面考虑:一是基本培养基;二是各种激素的浓度及相对比例。
MS培养基适合于大多数双子叶植物,B5和N6培养基适合与许多单子叶植物,特别是N6培养基对禾本科植物小麦、水稻等很有效,White培养基适合于根的培养。
首先试用这些培养基进行初步实验,可以少走弯路,大大;减少时间、人力和物力的消耗。当通过一系列初试之后,可再根据实际情况对其中的某些成分做小范围调整。
在进行调整时,以下情况可供参考。一是当用一种化合物作为氮源时,硝酸盐的作用比铵盐好,但单独使用硝酸盐会使培养基的PH向碱性方向漂移,若同时加入硝酸盐和少量铵盐,会使这种漂移得到克服。二是当某些元素供应不足时,培养的植物会表现出一些症状,可根据症状加以调整,如氮不足时,培养的组织常表现出花色苷的颜色(红、紫红色),愈伤组织内部很难看到导管分子的分化;当氮、钾或磷不足时,细胞会明显过度生长,形成一些十分蓬松,甚至呈透明状的愈伤组织;铁、硫缺少时组织会失绿,细胞分裂停滞,愈伤组织出现褐色衰老症状;缺硼时细胞分裂趋势缓慢,过度伸长;缺少锰或钼时细胞生长受到影响。
培养基外源激素的作用也会使培养物出现上述一些类似的情况,所以应仔细分析,不可轻易下结论。
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