根瘤菌k599具有什么抗性
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。K599发根农杆菌（NCPPB2659）含有pRi2659农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（葫芦科，豆科，茄科等），同时具有链霉素抗性。本公司生产的K599化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率>103 cfu/μg DNA。
常规操作方法
1.取-80℃保存的K599发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3. 冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2小时。
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3 天
● 农杆菌相关抗生素配方：
抗生素
配方
原液
工作液
羧苄青霉素 (carb)
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌
50 mg/ml
50 μg/ml
硫酸卡那霉素 (kan)
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌
50 mg/ml
50 μg/ml
链霉素 (strep)
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌
10 mg/ml
50 μg/ml
利福平 (rif)
DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌
10 mg/ml
20 μg/ml
庆大霉素 (gent)
双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌
20 mg/ml
40 μg/ml
氯霉素（cam）
无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌
34 mg/ml
34 ug/ml
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